metode bacteriologice

examen microscopic

Mycobacterium tuberculosis au forma unor tije subțiri, ușor curbate de diferite lungimi, cu îngroșări la capete sau la mijloc, sunt aranjate în grupuri și individual (Figura 1a) Vopsit frotiurilor Ziehl-Neelsen mikroskopiruyut sistem de imersie cu cel puțin 10 min.

microscopie fluorescentă

Metoda dezavantaje LM sunt costul semnificativ mai mare de un microscop cu fluorescență, o procedură cu respectarea okrashivaniya- și corectarea frotiu a pH-ului, precum și eliberarea de mycobacterii într-un material de diagnostic (in special in sputa) de mucus din jur, care împiedică pătrunderea colorantului fluorescent în celula microbiană. De aceea, practic pentru utilizarea LM sputei nativ, dar se recomandă să se aplice această metodă în studiul frotiuri preparate din extractul concentrat după materialul centrifugarea prelucrat pentru cultură și se neutralizează după decontaminare. Prin urmare, metoda LM ar trebui să fie utilizat în laboratoare de bacteriologie, unde examenul cultural și microscopice ar putea fi realizate din aceeași parte a materialului de diagnosticare.

Examinarea histologică sau citologic poate detecta uneori caracteristic pentru celulele de tuberculoza care rezultă reacția protectoare a organismului la introducerea bacilul tuberculos. Prezența în cytogram celule gigant Langhans rezolvă fără îndoială diagnosticul tuberculozei. Aceste celule au dimensiuni foarte mari (80 - 90 microni sau mai mult în diametru). Citoplasma este colorat în culoarea gri-albastru. La periferia acestuia este dispus în serie un număr mare de nuclee (până la 20), dispuse într-o formă de inel (figura 1c).

O altă caracteristică este prezența tuberculozei în prepararea așa-numitelor celule epiteloide care dezvoltă și celule Langhans. Acest lucru se întâmplă atunci când numărul de nuclee, fără separarea citoplasmei, care este în creștere în dimensiune (Figura 1, d).

Microscopie vă permite să obțineți rapid rezultatul, dar are o sensibilitate și specificitate scăzută, incapacitatea de a diferenția bacili acid rapid.

Figura 1 - Mycobacterium tuberculosis
și - colorare metoda Ziehl-Nelsenu
b - metoda de microscopie fluorescentă
in - celule Langhasa
r - celule epiteloide

Metoda de cultură

Cea mai comună metodă pentru detectarea Mycobacterium tuberculosis în țara noastră este metoda de cultură. Aceasta este „standardul de aur“ pentru diagnosticul bacteriologic al tuberculozei, deoarece sensibilitatea este mult mai mare microscopică și oferă cultura pură micobacterian pentru identificarea ulterioară și caracterizarea rezistenței la medicamente. Această metodă dă rezultate pozitive în prezența în materialul de 20 până la 100 celule microbiene viabile per 1 ml. Cu toate acestea, este laborioasă și datorită faptului că bacilii tuberculoși cresc foarte încet și detectarea lor poate fi înregistrată numai după 3 săptămâni de cultivare consumatoare de timp.

Punct de vedere istoric, pe bază de ou mediu de cultură (Lowenstein-Jensen, Finn-2, Ogawa, Anikin, "New", Popescu) au primit cea mai mare distribuire între medii nutritive dense folosite pentru a izola Oficiul. Material de semănat mediu Loewenstein-Jensen se realizează în laborator bacteriologic. Creșterea primelor colonii în media clasică observate după 4 - 8 săptămâni. Cu toate acestea, a apărut în ultimii ani Middlebrook mediu de agar (7N10, 7N11) detecta rapid de creștere micobacteriilor (de la două până la patru săptămâni) și să ofere oportunități mai bune pentru studiul morfologiei coloniilor decât în ​​mass-media de ou. Un dezavantaj al mediu nutritiv de agar este o incubare de inocul necesitate într-un incubator cu dioxid de carbon, cu toate acestea agar media nu sunt practic utilizate în România.

Trebuie remarcat faptul că, datorită selectivității ridicate diferitelor tulpini de micobacterii și nevoia de proteine ​​de înaltă calitate încă nici un mediu nutritiv universal. poate înlocui toate celelalte. Ordinul № 109MZRumyniyadlya semănat material de diagnostic pentru MBT recomandat să utilizeze același tub de mediu nutritiv internațional Lowenstein-Jensen și Finn-2. Cu toate acestea, practica arată că, în plus față de aceste medii ar trebui folosite și oricare alta, iar cultura pe trei tuburi de mediu nutritiv crește, de asemenea, eficiența diagnosticului culturii.

Pentru un diagnostic de cultură completă a tuberculozei trebuie să dispună de instalațiile și echipamentele corespunzătoare. Deosebit de important este prezența centrifugă și antiaerozolnoy protecția și capacitatea de a asigura accelerarea 3000g. Precum și securitate biologică pentru a preveni infecția intralaboratory.

Principalul dezavantaj al diagnosticului de cultură al tuberculozei este durata studiului - de la trei săptămâni până la trei luni. Prin urmare, cercetarea în continuare este încă relevantă pentru dezvoltarea de metode de accelerare a creșterii micobacteriilor.

sistemul BACTEC

Diagnosticul de cultură a tuberculozei se confruntă în prezent schimbări fundamentale asociate cu punerea în aplicare în practică a sistemelor de cultură a OIM complet automatizate. Diferența principală dintre aceste metode - utilizarea mediilor de cultură nutritiv lichid, urmat de radiometric (BACTEC 460), colorimetric (Mb-bact, BAC tALERT) și detectarea fluorescentă a creșterii (BACTEC MGIT 960). Creștere de birou în mediu lichid în aceste sisteme pot fi detectate deja după 1 - 2 săptămâni, în funcție de valoarea lor inițială a materialului de diagnosticare. Rata de detecție a Mycobacterium doar puțin mai mare decât pe un mediu nutritiv solid. Sisteme automatizate folosind fiole BACTEC adecvate conținând diferite medicamente anti-TB, reduce timpul de rezistenta medicamentului de studiu micobacteriilor la 10 - 14 zile.

Dintre aceste sisteme automatizate este cel mai eficient sistem în prezent BACTEC MGIT 960BD. flacoane MGIT cu un mediu nutritiv lichid cuprind 7H9 în partea de jos a unui indicator fluorescent de silicon „stins“ concentrații mari de oxigen. În prezența micobacteriilor în absorbția oxigenului în timpul creșterii indicatoare luminoase, înregistrare fluorescență sisieme BACTEC MGIT automat. Utilizarea sticlelor MGIT posibile și „manual“, apoi verificați strălucirea produsă de un transiluminator pe flacoane MGIT este de 11 zile.

Principalul dezavantaj al MGIT BACTEC, precum și alte sisteme BACTEC este costul ridicat al echipamentelor (până 100.000 $) și sticlele cu mediul - însămânțarea un eșantion costurile materiale de diagnostic până la 400 de ruble.

Semănatul în forma L Mycobacterium

Așa-numitul perete celular defectuos al bacililor în formă de L și alți agenți patogeni infecțioși sunt rezultatul variabilității și principalul tip de persistență, adică experiențele în condiții nefavorabile. Semănatul în forma L este deosebit de eficient pentru tuberculoza extrapulmonară vegetația MBT în focarele la VLT ridicată acidozei și anaerobioză reduce activitatea lor viabilitate și enzime.

Diagnosticul nu se poate face numai pe baza detectării mycobacterii L-forme, dar detectarea acestora, în special atunci când verificarea prin metoda PCR este un argument puternic în favoarea naturii tuberculozei a bolii. Focare de TB extrapulmonară are loc mai devreme L-transformarea mycobacterii, astfel descoperirea lor permite de a diagnostica în stadiile incipiente ale bolii.

Informații generale și comerciale