Preturile noastre sunt mai mici decât în alte locuri, deoarece noi lucrăm direct cu furnizorii de documente.
Metode de livrare
Se aplică la bovine, ovine, porcine și alte animale (animale cu blană, câini și pisici), neaktsinirovannyh vaccinuri vii, și stabilește metodele de diagnostic de laborator al bolii Aujeszky
Limitarea perioadei de valabilitate de la: numărul de protocol de la 3-93 IGU 12/3/93 (ICS № 5-93)
de la 01/07/84 la 01 -07.8 "
Nerespectarea cu standardul urmărită penal
Acest standard se aplică la vite, un berbec, porci și alte animale (animale cu blană, câini și pisici), nealinierea vaccinate cu vaccinuri vii, și stabilește metode de diagnostic de laborator al bolii Ausski.
Standardul este utilizat în diagnosticarea bolilor la animale în laboratoarele veterinare ale instituțiilor de cercetare.
Standardul este în deplină concordanță ST 3454 81 SEV.
1. METODA DE PRELEVARE A PROBELOR
1.1. Pentru a efectua o probă și a virusului izolarea materialului patologic biologic prelevat de la animale în timpul perioadei de semne clinice maxime ale bolii (temperatura de reacție, depresie, anorexie clinica, prurit, zgariere). De la animale sacrificate și materialul patologic scăzut ar trebui să fie luate și analizate în vara pentru b h. Și cu condiția ca stocarea într-o stare de refrigerare timp de 10-12 ore.
1.2. La animale de laborator livrate pacienților, cadavre sau bucăți de țesut animal și organe (creier, măduva spinării, plămân, ficat, splina, ganglionii limfatici, amigdalele), de la animale avortat -plody și placenta.
1.3. DLI probe de la animale serologice Acoperise de testare luând în fiole sterile și nu mai puțin de 5 cm3.
pagina 4
Op. 2 GOST 257J3-®J
Serul a fost preparat prin metoda noroiului să-l păstrați până la 10 zile la + 4 ° C Aceasta a permis o depozitare pe termen mai lung de ser la o temperatură de minus 20 ° C Ser să fie transparente, cu nici un semn de hemoliză.
1.4. materialul patologica livrat laboratorului cu documentele însoțitoare, care indică numele fermei, tipul și vârsta animalului, datele epizootii, tabloul clinic și patologic-anatomice, informații cu privire la imunizarea animalelor și vaccinul.
2. METODA vIOLOGIChESKOY Provo
Metoda constă în reproducerea bolii la iepuri sănătoși prin inocularea materialului patologic.
2.1. Echipamente, sunt utilizate materiale și reactivi pentru testul:
centrifuga cu o viteză de rotație de cel puțin 3000 rot / min;
Termostat nagreaa cu temperatură de 37 C C;
seringi de capacitate de 1 sau 2 cm 3;
soluție sterilă salină, pH = 7,2;
soluție salină sterilă tamponată, pH- * 7,2;
antibiotice cu spectru larg.
2.2. sondaj Pregătirea
2.3. efectuarea de cercetare
Pentru a efectua o probă biologică utilizând iepuri cântărind 2-2,5 kg. Supranatantul a fost preparat prin n. 2.2, doi iepuri au fost injectate intramuscular la o doză de 1-2 cm 3.
2.4. Prelucrarea rezultatelor
Bnoprobu considerat pozitiv dacă animalele au murit cu semne clinice ale bolii Aujeszky (clinica nervos, mâncărime, zgarieturi) în 2-10 zile după suspendarea inokulnrovannya materialului patologic. În cazul în care animalele sunt ucise fără recunoaștere
pagina 5
GOST 2575J- »Pagina 3. 3
Cove Aujeszky biotestare bolii a fost repetată folosind materialul patologic al primului pasaj.
Moartea iepuri după administrarea materialului patologic suspensie de la porci, fara dovezi de mancarime si zgarierea pot indica alocarea Aujeszky tulpinilor de vaccin virus.
Moartea iepuri după administrarea suspensiei materialului de la animale cu blană patologice fără semne de mancarime si zgarierea pot indica tulpinile de vaccin de alocare de virus Aujeszky shatogennyh pentru animalele de blană.
Pentru identificarea virusului se realizează izolarea virusului în culturi de celule, urmată de neutralizarea formulării de reacție.
3. Izolarea virusului în culturi celulare
Metoda constă în detectarea efectului tsntopaticheskogo (CPE) al virusului în culturi celulare și identificarea ulterioară.
3.1. Aparatul, materialele și reactivii utilizați pentru studiu: temperatura de încălzire termostat 37 ° C; centrifuga cu o viteză de rotație de cel puțin 3000 rot / min; balanță de laborator cu o eroare de cântărire nu mai mare de 0,01 g;
uscare Rack; microscop de orice marca; frigidere; o baie de apă;
Unitatea tripsinnzatsin țesuturi; măsurarea pipetă în conformitate cu GOST 20292-74; tuburi de sticlă în conformitate cu GOST 25336-82; Plăcile Petri în conformitate cu GOST 25336-82; sterilizarea filtre de diferite dimensiuni; soluție sterilă salină tamponată, pH 7,2; mediul de creștere și pohcherzhivayushuyu nutritiv; o soluție de tripsină;
ser bovin pentru culturi celulare; antibiotice și medicamente mikostatncheskie; fenol roșu în conformitate cu GOST 4599-73; tripan soluție albastră;
cultură de celule primare trnpsinnzirovannyh rinichi și tiroidă porcine testiculelor viței de celule embrionar de pui. line RCT. VMK21 (oricare dintre acestea);
pagina 6
virusul bolii Aujeszky cu un titru de cel puțin 1 U TCD „UCL>;
animalele sgvorogku care nu conțin anticorpi la virusul bolii Aujeszky (negativ);
gnpernmmunnuyu specifice ser împotriva bolii Aujeszky (pozitiv).
3.2. Pregătirea pentru și unitățile ff de o n th - la punctul 2.2 ..
3.3. efectuarea de cercetare
Tuburile de cultură celulară pipeteaza 0,2 cm3 din fiecare material testat. Pentru fiecare probă, se utilizează tuburi 4-6. Tuburile au fost infectate cu culturi de celule a fost incubată la 37 ° C timp de 30 min. Apoi, tuburile au fost îndepărtate din supernatantul de cultură de celule și se adaugă 1,8 cm3 de mediul de creștere de sprijin conținând antibiotice.
În controlul folosind 4- tuburi 6 culturi de celule neinfectate în care mediul de cultură se realizează înlocuit. Tuburile au fost infectate cu controale de culturi celulare și incubate la o temperatură de 37 ° C timp de 2-5 zile și zilnic tsitopatichesknh mnhroskopiruyut contabilizarea modificărilor. Când tsitopatnchesknh fluid de cultură modificări din fiecare tub a fost combinat și identificarea virusului izolat produs. Dacă materialul de testat este toxic pentru celulele sau imposibil de a determina specificitatea DPC, efectuată trecerea suplimentară.
3.4. Prelucrarea rezultatelor
Rezultatul studiului materialului supus încercării este considerat pozitiv. Dacă detectat în culturi celulare efect-ing tsntopatogen a virusului, care apare in celulele rotunjite, apariția celulelor gigant și liza celulelor cu depărtarea celulelor deteriorate din sticlă.
În culturile de control (neinfectate) tsntopatncheskah nu trebuie modificată.
Conform rezultatelor studiilor virologice bolii Aujeszky sunt diagnosticate în cazul speciilor aparținând virusului izolat din culturi celulare au confirmat în reacția de neutralizare (metoda de identificare a virusului).
METODA DE IDENTIFICARE A VIRUSULUI
Esența este de a detecta metol pigopatncheskogo suprimarea virusului în cultură de celule folosind un ser pozitiv.
4. Instrumentele și materialele și reactivii -prin n. 3.1.
pagina 7
GOST 2J753-83 Crp. 5
4.2. efectuarea de cercetare
Înainte de a activa reacția de neutralizare din ser pozitiv și negativ a fost diluat 1:10 în mediu de cultură pentru cultură celulară conținând antibiotice, și se încălzește într-o baie de apă la 56 ° C timp de 30 de rude. (. 7 bucăți) baiți două rânduri de tuburi sunt adăugate la 2 cm 8 ser la fiecare tub: primul rând - pozitiv, al doilea - negativ.
Se prepară diluții de zece ori ale virusului de test de la 10- 1 la I0- 1 într-un mediu nutritiv pentru cultura de celule în cantități suficiente pentru stabilirea de reacție și introduse în cele două rânduri de tuburi cu diluții de seruri pornind de la I0 -7. într-un volum de 2 cm3 per tub. Tuburile cu un amestec de ser și a virusului diluții vstryahnvayug și incubate la 37 ° C timp de 1 h. Apoi, fiecare amestec cu diluții de ser ale virusului contribuie la 1 cm 3 pe 4 tuburi de cultură de celule. Tuburile au fost incubate într-un termostat la 37 ° C
4.3. Rezultate Obra Botko
Rezultatele reacției sunt efectuate la tsntopatncheskomu la virusul după 2-5 zile. În acest scop, titrul virusului de testare în prezența seruri pozitive și negative și zyrazhayut în jurnalele de $ TCD. ; „*. Titrul este calculat prin metoda lui Reed și Muench. Speciile din stocul de virus este stabilit la diferența în titrurilor de seruri pozitive și negative de cel puțin două bușteni.
Se prepară o două diluții de seruri de testare de la 1 • 2 la 1. 16 într-un mediu nutritiv pentru cultura de celule cu anti-
pagina 8
Cip. 6 GOST 2J7SJ-83
biotikamn. Apoi, o cantitate necesară de virus ce conține TTsDdasi 1000 și un volum egal de ea în fiecare eprubetă cu diluții seriale de seruri. Amestecul a fost agitat și seruri de virus, se incubează la 37 ° C timp de I h, apoi -1 în tuburi de cultură de celule pipeteaza 0,2 cm3 de amestec de ser și a virusului și se incubează la 37 ° C timp de 30 min. După această perioadă tuburile în cultura de celule pipeteaza 1,8 cm * mediu de susținere. În același timp, a pus următoarele controale:
culturi de celule de control neinfectate în tuburi 3-4, în care schimbarea mediului de cultură se realizează;
controla doza de virus. Pentru a controla acuratețea dozei de virus colectat în reacție, din diluția de lucru a virusului (aproximativ $ 1000 CDT, o.1sy>) preparare diluții la 10
4. Pentru fiecare diluție de virus utilizat 3-4 tuburi cu culturi celulare. Tuburile de cultură celulară face o diluție de lucru a virusului și diluția serial într-un volum de 0,1 cm. După expunere la 37 ° C timp de 30 minute, în tuburi cu celule de cultură s-a adăugat 1,9 cm3 de mediul de creștere de sprijin;
monitorizarea toxicității serului. Pentru a determina toxicitatea serului în culturi eprubetelor pipeteaza 0,1 cm 3 diluție a serului și 1,9 cm 3 de susținere a mediului nutritiv (tuburi 3-O cultură celulară, la fiecare diluție a serului);
controlul asupra specificității virusului. Tuburile cu cultura celulelor infectate cu virus într-un amestec cu o doză dublă dintr-o diluție de lucru anterior titrul seric specific (3-4 tuburi cu culturi de celule pentru fiecare diluție a serului amestec + virus specific).
Toate tuburile de culturi celulare utilizate în reacția a fost incubat la 37 ° C S.
Conduita controlul microscopic zilnic culturilor celulare. Contabilizarea reacția se efectuează la apariție tsitopzti-agenții unui virus în doze de virus de control luate pentru reacția de neutralizare.
3.4. Prelucrarea rezultatelor
Studiul Serologic de seruri de subiecți considerate a fi pozitive în absența efectului citopatic asupra timpului efectuării serului de 1: 2 sau mai mare, în prezența următoarelor rezultate în koitrolyah:
în controlul culturii celulare ar trebui să fie nici o schimbare mono-c. Celulele yu;
pagina 9
o doza de control al acțiunii tsitopatncheskoe virusului trebuie să fie în lucru diluții de diluție și de viruși și 10“, 10„și 10 10 -3 4 (în diluția finală a cel puțin două tuburi) .;
în control „toxicitate seruri în cazul pozitiv)! ser (animalele bolnave) tsitopaticheskny nici un efect, deoarece diluții de ser 1: 2; cu ser negativ (nici un anticorp specific) trebuie să fie un efect tsitopaticheskny ca în culturi cu doze de virus de control (diluție de lucru);
în controlul specificității virusului nu este efectul tsitopaticheskny în culturile inoculate cu un amestec de ser și virusul specific.
Prezența anticorpilor specifici în serul subiecților indică infectarea indivizilor, grupurilor, animal patogen Aueskn sau posibila vaccinarea animalelor împotriva bolii Aujeszky.
Pozitiv serologice de cercetare metoda seruri nevaktsshshrovannyh animale indică suspiciunea de boală, ceea ce confirmă stabilirea unei probe biologice.
pagina 10
Corector EI Eeteeva
Sd ** 0 s Titlu IAB 05S6.83 la punctul „h. 07.05 * 3 0.W5 p. I. 0,48 UCH. Nivelul I 6 nad<Х» Цена 3 доп.
Ordinul de Onoare „standarde Editura * Ziak“. 11I5T. București. Novooresienskmy ver. 3 TMI. „Ms<ковсг.нА зечаткмк». Бухарест. Лплид пер. в. Зак. 527