Federal Instituția de Stat de învățământ superior profesional „Academia de Stat din Moscova de Medicină Veterinară și Biotehnologie
NAME K. I. Skryabina "
M. Sh Akbal, NV Esaulova, OE Davydova
SA Shemyakova, D. N. Shemyakov
Diagnosticul de VITEILOR criptosporidioza
M. Sh Akbal, NV Esaulova, OE Davydov SA Shemyakova, D. N. Shemyakov. Diagnosticul de viței criptosporidioza: Linii directoare. M. FGOUVPO „le MGAVMiB. „20c.
Metodele sunt descrise pentru diagnosticul vițeilor criptosporidioza date epizootologie, simptome si teste de laborator tehnici moderne.
Acesta este destinat pentru studenții de la facultatea de medicină veterinară, veterinară și Facultatea biologică a experților veterinari și profilul.
Referent: și. despre. Head. Departamentul de diagnostic clinic de boli și tinere profesor
Aprobat la ședința comisiei de învățământ-metodică UPF FGOUVPO „le MGAVMiB. „Din data de 01.01.01, procesul-verbal.
Criptosporidioza - boală acută sau subacute care curge animalele tinere cauzate de protozoare din genul Cryptosporidium, familia Cryptosporidiidae, dezlipire Coccidiida, clasa Coccidea, tip Sporozoa (6).
La mamifere, două specii provoca cryptosporidiosis - C. parvum și C. murin (4). specii de Cryptosporidium nu au o specificitate îngustă pentru gazde. Oochisti de la viței infectați cu succes miei, capre, șobolani, șoareci, în vârstă de 3 până la 5 zile (Heine, Boch, 1981). Criptosporidiozei a fost diagnosticat la 12 persoane care au avut contact direct cu vițel în timpul unui focar de criptosporidiozei au (o boală manifestată prin diaree și crampe în abdomen) (Reese, 1982).
Natura sursei de infecție este rozătoare sălbatice și sinantrope, câini, pisici, păsări, care au cryptosporidioza apare fara simptome evidente ale bolii (14). La viței cryptosporidiosis se caracterizează prin leziuni ale tractului gastrointestinal, semnele clinice ale bolii au fost înregistrate, în principal, în vârstă de 2-20 zile. O condiție necesară pentru dezvoltarea formelor severe de criptosporidioză este o schimbare a indicilor imunologici. Criptosporidioza este, de asemenea, remarcat faptul ca o boala oportuniste, ceea ce complică în mod semnificativ de bază - infecțiilor virale și bacteriene.
În prezent, dezvoltat metode de diagnosticare a animalelor criptosporidioza, dar nu există nici o literatură care ar generaliza datele și a recomandat medicilor veterinari metodele cele mai accesibile și eficiente de diagnostic de laborator.
biologie de dezvoltare a patogenului
Parazitara in intestine de mamifere C. parvum este un parazit gomoksennym (dezvoltat fără a schimba gazdele).
Mediul extern al intestinelor de animale infectate patogen este eliberat sub forma de oochisti invazive, oochiști în structura care amintește de bine-cunoscut protozoare parazite - Amery. oocyst Cryptosporidium diferă de aceasta dimensiune considerabil mai mica (medie - 4,5 microni) și situată liber în interiorul nu este inclus în sporociste 4 sporozoiți. oochisturi sunt în general rotunjite, au corp rezidual.
oochisti infectios alocate animalelor bolnave sau purtător în corpul unui traseu alimentar animal sănătos. În intestinul subțire al învelișului rupt, eliberând 4 sporozoită care sunt introduse vierme în zona dintre celulele epiteliale Villi. ele nu pătrund în citoplasma celulelor, dezvoltarea în continuare are loc pe suprafața marginii în perie a celulelor epiteliale (zona microvililor) (4). Așa numita vacuole parasitophorous: cryptosporidium sunt în contact cu celulele de la baza microvilozităților; microvilozităților dintre ele sunt conectate „se lipesc între ele“, membranele lor fuse, limitând parazit din lumenul intestinal. vilozități apropiere aplatiza atrofie. Pe partea citoplasmei celulelor afectate formate structuri pliate - organelle hrănire.
vacuole parazitofore sunt formate în decurs de 24 de ore după infectare. In interiorul acestora există reproducerea asexuată a agentului patogen - schizogonie (fisiune multiplă) trofozoizi (formarea sporozoites rotunjite, care au început să se hrănească). Schizogonie are loc în decurs de 72 de ore, a generat numeroase schizonți depuse la granita perie a altor celule. După formarea generației schizonți 2 nd are loc gametogonie - proces sexual. Formata celule sexuale masculine (microgamete) care fuzionează cu femei (macrogametes), la granița cu perii. Zigotul se formează, care cade în lumenul intestinal, cruste devin proprietatea oocistului. sporuleazå oochist (4 format în interiorul sporozoită) și ieșire deja invazive la mediul extern. Aproximativ 80% din oochisturilor sa iasa din intestin cu fecale și au o piele groasă. Restul de 20% din ouăcistelor au o membrană subțire și rămân în intestin, cauzând autoinvaziya și subacută a bolii (12).
Perioada de agent patogen Prepatentny (timpul scurs de la momentul infectării primelor coccistului alocare) la viței este de 3-7 zile, brevet de invenție (ouăcistelor de alocare în masă) - 8-12 zile. În cursul bolii de-a lungul intestinului subțire (în special în jejun și ileum) formate porțiuni extinse atrofie și descuamarea epiteliului.
Boala se dezvoltă adesea la animale debili imunodeficiente, precum și ferme, nefavorabile pentru streptococcosis, ehsherihioza, infecții virale (3; 11). Gradul de invazie vițeilor (EI) poate ajunge la mortalitate 6-68% - 17-50% (1, 7).
Agravarea situației epizootice criptosporidiilor în ultimii ani, este, probabil, din cauza introducerii conținutului tehnologiei, în care animalele sunt concentrate într-o zonă mică, și facilități de creștere a animalelor sunt exploatate cu mare încărcare (9). Aceasta contribuie la răspândirea rapidă a bolii în ferme de excreție în materiile fecale ale pacienților vițeilor sporula deja oochisti (infecțios), rezistență considerabilă a mediului extern (menținut viabilitatea până la 16 luni, la o variații de temperatură, dezinfecție prin mijloace convenționale) și de descărcare de mare intensitate (în 1g de fecale de pacienți un vițel poate conține peste 1 Mill. oochisti) (12).
Infectat în primele zile de viață, vițeii sunt purtători de Cryptosporidium, până la vârsta de 8 luni. Sursele de infecție pot servi, uneori, vaci adulte, personal, pisici, câini, insecte (12). Sursa de contaminare este hrana, apa, echipamente, și așa mai departe. N. Contaminate cu agenți patogeni.
Pentru dezinfectarea Telyatnikov recomandată soluție de formalină 10%, sau soluție de amoniac 5%. care cauzează moartea ouăciste timp de 18 ore. De asemenea, este necesar să se lupte cu șobolanii cu ambii purtători majori și distribuitoare de infecție la ferme.
Patogenie si caracteristici clinice
Cryptosporidium este de obicei localizată în intestinul subțire, cel puțin - în mucoasa gastrică, cazuistică - în trahee, conjunctiva ochiului. Modificări semnificative se observă în ileonul terminal și jejun. Există atrofie vilozităților, scobiturile crater ca ale epiteliului. vilozități împreună, Afectati îngrămădit pierde in celulele caliciforme (1; 12). Ca o consecință a acestui fapt, există malabsorbție. distrugerea mecanică a paraziților Villi duce la necroză. fluid conținut intestinal cu bule de gaz (13).
La locul de atașare a parazitului nu microvililor, suprafața de aspirare a intestinului este redus foarte mult, a redus în mod semnificativ și capacitatea de absorbție, care este principala cauza de diaree. Activitatea enzimei variază, digestia intestinală perturbate se produce descompunerea proteinelor putrefacție în intestin. Se dezvoltă intoxicarea natura secundară a organismului.
Primele semne ale bolii sunt observate în primele zile de viață de viței, atunci boala progresează, creșterea diaree profuza, depresie, pierderea poftei de mâncare, slăbiciune. fecale de animale galben sau alb-gri, apos datorită malabsorbtie, un miros putredă - din cauza încălcării enzimei digestive. Adesea, ele sunt văzute striuri de sânge și bucăți de mucoasei. Odată cu dezvoltarea bolii poate fi încheiată tenesme, fluxul de fecale spontan. Temperatura corpului în cursul bolii nu este de obicei ridicată, iar în severe - coborâte.
În sânge, există eozinofilie, leucopenie, limfopenie. reducerea proteinelor totale serice și gamma-globulină, glucoză (1; 2).
Subacuta autoinvaziya datorită oochisti cu pereți subțiri rămase în intestine, este un caracter lung cu semne si rezultate in intarzierea cresterii clinice sterse, deficit crestere in greutate si in cele din urma - pentru a reduce calitățile reproductive și productive ale animalelor (5).
Pacienții cu animale în intestin afectat observat inflamație continuă sau peticită catarală a membranei mucoase, umflarea si subtierea acestuia, congestie, depozitele de fibrină și mucus, descuamare epitelială, hemoragie. Pe specimene histologice preparate din secțiuni ale intestinului subțire al pacienților vițeilor scurtarea poate fi văzut, aplatizarea vilozităților și atrofie microvilozităților lipsesc sau glycocalyx redus foarte mult. citoplasmă vacuole enterocitelor observate intra - edem și extracelular, infiltrarea straturilor mucoase și submucoasă peretelui intestinal prin neutrofile și macrofage, sângerări diapedetic din vasele de sânge deteriorate. glanda zbârcite și intestinală umplute cu detritus celular (1; 5).
ganglionilor limfatici mezenterici sunt mărite, uneori congestionat, tăiat - suculent. Există o corelație directă de severitatea modificărilor patologice ale gradului de celule daune Cryptosporidium.
Trebuie subliniat faptul că schimbările similare pot fi datorate altor cauze leziuni intestinale; cryptosporidiosis patogenie adecvată este prost inteleasa (1).
Diagnosticul de laborator criptosporidiilor
Diagnosticul criptosporidiilor stabilesc pe baza studiilor de fecale de laborator (in vivo) și a materialului patologic (post-mortem) cu epizootia, clinice și datele patologice.
Pentru a studia în ghidul de laborator:
probe de fecale proaspete care cântăresc aproximativ 10 g de rect, luate de la 10-20 de animale suspectate probe de boală testate în ziua selecției;
probe de patmateriala de la cadavre - pilitură și frotiuri siturilor intestinale infectate sau porțiuni ale intestinului subțire, care este necesară pentru a investiga nu mai târziu de 6 ore după moartea animalului.
Prepararea frotiuri din fecale proaspete. Pe o lamă de sticlă acoperită degresat fecale picătură, diluat cu picătură soluție salină, a distribui un strat subțire (fără presiune!). Frotiu rezultat se usucă la temperatura camerei.
Utilizarea metodelor de plutire. O probă de 3 g de fecale au fost plasate într-un pahar de laborator de 50 ml, se toarnă cantitate mică de soluție saturată de clorură de sodiu (400 g la 1 litru de apă fierbinte, densitatea soluției de 1,18 g / ml) sau sulfat de zinc (400 g per 1 litru de apă, densitatea soluției 1,24 g / ml) sau un amestec de clorură de Pavlaseka (zinc - 220 g de clorură de sodiu - 210 grame, apă - 800 ml). se amestecă cu grijă tijă se adaugă la o soluție de marginile de sticlă, se filtrează printr-o sită și se lasă să stea timp de 15-20 minute. Apoi, bucla de metal este scos 15-20 picaturi cu pelicula de suprafață este transferată pe o lamelă de sticlă face frotiu subțire și se usucă în aer.
Utilizarea centrifugare în combinație cu flotație. O probă de 3 g de fecale au fost plasate într-un pahar de 50 ml, se adaugă 15 ml de apă, se agită, se filtrează printr-o sită metalică, se toarnă într-un tub de centrifugare și se centrifughează la rot / min timp de 1-2 min. Supernatantul este decantat, la reziduu s-a adăugat una dintre soluțiile de flotație identificate mai sus, se amestecă și se centrifughează din nou, în același mod. buclă metalică este îndepărtată 15-20 picături, cu filmul de suprafață este transferată pe o lamelă de sticlă face frotiu subțire și se usucă în aer.
Fixarea frotiuri. Pe frotiu uscat se aplică câteva picături de etil (metil) și fixat în alcool timp de 10-15 minute până când evaporarea completă a alcoolului. Apoi frotiul colorat cu una dintre următoarele metode.
Colorat frotiu Ziehl-Nielsen. Pentru a prepara soluția Ziehl intr-un mortar face fucsină de bază - 2r adăugat 2-3 picături de glicerol a fost triturat complet agitat în timp ce adăugarea treptată de alcool etilic de 96 ° - 12 ml, de acid carbolic - 5 g, și apă distilată - 100 ml. Soluția se toarnă într-o sticlă cu dop etanș, amplasat într-o zi într-un termostat la 37 ° C și se filtrează prin hârtie de filtru.
Frotiurile Freeze colorate timp de 20 minute în soluție fucsin fenolic, se spală în apă, ușor uscate curgătoare și aplicate sticlei soluția de acid sulfuric 7-10% timp de 30-60 secunde pentru albire. Apoi, se spală în apă și frotiu rulează dokrashivayut soluție verde malachit 5% timp de 1-2 minute.
frotiuri de colorat Safraninul pentru Kuster. Se prepară soluția de safranina separat 3% și soluție 5,6% de KOH în apă distilată. Înainte de a aplica soluția preparată de lucru: 5 picături de proaspăt luat safranin soluție și se amestecă cu 1,5 ml de soluție de KOH.
Frotiul fix colorate cu soluție de lucru Safranină timp de 5 minute, se spală cu apă, se decolorează cu soluție de 0,5% acid sulfuric timp de 15 secunde, se spală cu apă, 5% sodiu dokrashivayut verde malachit în 10% etanol timp de 10-15 secunde, se spală cu apă și se usucă în aer.
frotiuri de colorat pe Romanovsky-Giemsa. Soluție de colorare lucrare preparată din rata de 1-3 picături de vopsea gata pentru 1 ml de apă (pH = 7,0-7,2). Într-un preparat utilizat 3,4 ml de cerneala diluată.
Frotiurile fixe colorate timp de 20-30 minute, după care acestea sunt spălate cu apă distilată și se usucă.
Evaluarea rezultatelor de culoare. frotiuri uscate vizualizezi un microscop cu putere mare de mărire, cu un obiectiv de imersie.
- Ziehl-Nielsen - oochisturi sunt acid-rotunjite, de 4-5 mm, de culoare roșu aprins diferite nuanțe; acestea se disting clar pe fundal verde comună frotiu.
- de Kuster - oochisturilor sunt vopsite într-o culoare roz pal.
- Romanovsky-Giemsa - oochisti rotunjite nu sunt vopsite sau pătată slab, în interiorul lor vizibile la periferia sporozoiții alungite ușor curbat, albastru pal cu un talon roșu.
Evaluarea intensității infecției cu o medie de 10 câmpuri de vedere al microscopului:
+ - mici (1-3 ovocite);
++ - medie (până la 25 de oochisti);
+++ - (mai mult de 25 de oochisti).
Diagnosticul post-mortem este criptosporidioza anumite dificultăți: în legătură cu dimensiunea redusă a ouăcistelor similitudinea lor pe frotiurile exterioare cu picături de grăsime, celule roșii din sânge, etc precum autoliză rapid .. Cerința obligatorie - prevenirea și congelare patmateriala decongelare. Frotiuri și pilitură au fost fixate cu etanol și colorate în conformitate cu Ziehl-Neelsen, apoi vizualizate în mărire ridicată microscop utilizând o lentilă de imersie (5; 13).
Coccistului studiu frotiuri Cryptosporidium să se facă distincția între alți agenți patogeni care cauzează enterită tinere. Ouăcistele ejmery frotiuri - diferite forme, criptosporidium considerabil mai mari, pot fi distinse în termen de patru sporociste, fiecare conținând două sporozoites. Helmint ou - mare, oval, circular sau bochonkovidnoe, cu învelișul unei structuri complexe (1).
Datorită semnelor clinice relativ nespecifice etiologia enterită kriptosporidioznom, trebuie diferențiată de enterită de natură infecțioasă, pentru a defini rolul principal al agenților patogeni în aspectul lor. (20predlozhen metoda indicativă detectarea enterita patogen lider în frotiuri Gram colorate din mucoasa intestinală vițeilor (Tabelul 1).
Diagnosticul diferențial criptosporidiilor frotiuri din mucoasa intestinală.
Vedere din câmpul vizual al microscopului în studiul frotiuri
5. Instrucțiuni temporare metodice pe studii de laborator pe animale cryptosporidioza (aprobat de veterinariiRumyniya9.06.88 de stat ..) - M. 1988.
8. Dinamica Pashkin și vârstă Criptosporidioza viței fermele de creștere din regiunea Leningrad // Coli. Scien. Tr. LVI. - L. 1989. - numărul 000. - pp 77-81.
9. Guty viței // Medicină Veterinară. - numărul 1989. 8. - pp 46-48.
10. A et al. Distribuția cryptosporidioza în fermele de creștere a animalelor viței // regiunea Leningrad C. științifice. Tr. LVI. - 1989. - № 000. - S.82-85.